為什么我的Elisa結(jié)果如此奇怪？

分析全部顯一致色的可能原因就有這樣之多（可能還不全）：

1 水質(zhì)被金屬離子等污染；防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水

2 洗滌不充分，樣品中其它成分殘留或酶殘留；防止辦法洗滌液應(yīng)注滿微孔，充分洗滌

3 移液頭重復(fù)使用，未洗凈或**不完全； 防止辦法移液頭*好一次性使用

4 酶標(biāo)版太靈敏，我后期做試劑盒時(shí)曾經(jīng)用過幾次進(jìn)口的好的板子，結(jié)果那板子真好，忒好了，吸附性超強(qiáng)，全給我顯色，氣死了。連方陣都做不出來：-（

5 還有一抗顯色時(shí)間的控制等等，關(guān)于ELISA的每一步都要注意才行啊。我也是硬從粗心的人變?yōu)榧?xì)心了，沒辦法，要不是為了實(shí)驗(yàn)啊。。。

從你說的情況看，你以前測(cè)IgG有良好的梯度，而現(xiàn)在測(cè)IgE梯度不明顯，它們的差別在于測(cè)IgG是用HRP標(biāo)記的二抗，而測(cè)IgE用生物素標(biāo)記的二抗。我覺得在排除你的ELISA操作不熟練出現(xiàn)問題的情況下，你可以考慮以下因素：

1、是否是生物素標(biāo)記的二抗有問題？是進(jìn)口貨還是國(guó)產(chǎn)貨？檢驗(yàn)生物素標(biāo)記的二抗有無問題，可以將二抗稀釋成不同濃度，然后用底物使之顯色，簡(jiǎn)單的說就是給二抗做個(gè)方陣，看看它的顯色及靈敏度；

2、你一抗稀釋的*大倍數(shù)是多少倍？你做方陣時(shí)，可以把一抗稀釋的梯度拉大一些，如果現(xiàn)在做到20萬倍稀釋，還可以繼續(xù)往下，比如40萬、80萬、160萬……因?yàn)槿绻豢沟臐舛确浅４?，效價(jià)很高的話，那么肯定是需要稀釋到很大的一個(gè)倍數(shù)后顯色才會(huì)有明顯梯度出現(xiàn)。

3、你的空白孔有沒有包被抗原？如果包被抗原了，但結(jié)果不顯色則說明你的包被封閉等操作都沒問題；如果沒有包被抗原直接封閉的，*后不顯色，那說明二抗沒有什么非特異性吸附。

4、我還想問一下，陰性對(duì)照如何？也顯色嗎？如果陰性對(duì)照也顯色，那抗原的用量可能比較大了，再往下稀釋。

此外，洗板子也要注意，盡量勿加滿孔，小心串孔。沒有洗板機(jī)不是問題，我做了3年ELISA，也沒有洗板機(jī)，還不是都拍過來了，呵呵。